LAPTM4B Plasmide Double Nickase (h): sc-408254-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- LAPTM4B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il LAPTM4B Double Nickase Plasmid (h) e il LAPTM4B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LAPTM4B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
LAPTM4B Plasmide Double Nickase (h) | sc-408254-NIC | 20 µg | $410.00 |
LAPTM4B (lysosomal protein transmembrane 4 beta) è una proteina di membrana lisosomiale/endosomiale a passaggi multipli che regola il traffico intracellulare, la segnalazione associata ai lisosomi e la dinamica delle membrane. Partecipa a processi di trasporto endolisosomiale che influenzano il turnover dei recettori e vie a valle come PI3K/AKT e l’omeostasi autogagia-lisosoma, con effetti sulle risposte allo stress cellulare e sul sensing dei nutrienti. Un’alterata espressione di LAPTM4B è stata associata a cambiamenti nella proliferazione, nell’invasività e nella gestione dei farmaci in diversi contesti tumorali, rendendola un bersaglio rilevante per analizzare meccanismi centrati sul lisosoma in modelli di malattia. Nelle cellule umane, LAPTM4B è inoltre studiata per i suoi ruoli nell’organizzazione vescicolare e nella modulazione degli output di segnalazione dei recettori internalizzati.
LAPTM4B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LAPTM4B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LAPTM4B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LAPTM4B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LAPTM4B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.