Lamin B1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400032-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Lamin B1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Lamin B1 Double Nickase Plasmid (h) e il Lamin B1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LMNB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Lamin B1 Antibody (A-11): sc-377000
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Lamin B1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400032-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Lamin B1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400032-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LMNB1 codifica la lamina B1, un componente fondamentale della lamina nucleare che polimerizza sotto la membrana nucleare interna per mantenere la forma del nucleo, l’organizzazione della cromatina e la meccano-trasduzione. La lamina B1 partecipa alla disgregazione e al riassemblaggio dell’involucro nucleare durante la mitosi, regola la replicazione e la riparazione del DNA e influenza la trascrizione attraverso i domini associati alla lamina, che posizionano l’eterocromatina alla periferia nucleare. Alterazioni del dosaggio o dell’organizzazione della lamina B1 sono state collegate a difetti di mielinizzazione e a fenotipi neurodegenerativi e, più in generale, a vie che governano la stabilità del genoma, la progressione del ciclo cellulare e l’architettura nucleare. In quanto impalcatura per la segnalazione e le interazioni con la cromatina, la lamina B1 è spesso studiata nel contesto della senescenza cellulare, del differenziamento e delle risposte allo stress.
Lamin B1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LMNB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LMNB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LMNB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LMNB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.