KIF2C Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404645-LAC

KIF2C (noto anche come MCAK) codifica una depolimerasi dei microtubuli della famiglia kinesina-13 che regola la dinamica dell’estremità “plus” dei microtubuli durante la mitosi. Controllando gli attacchi tra cinetocoro e microtubuli, l’assemblaggio del fuso e la congressione dei cromosomi, KIF2C contribuisce a garantire una corretta segregazione cromosomica e l’accuratezza del processo mitotico. La sua attività si integra con i processi del ciclo cellulare e del checkpoint del fuso ed è funzionalmente collegata a vie che governano la stabilità del genoma. Un’espressione o una funzione deregolata di KIF2C è spesso studiata nel contesto dell’instabilità cromosomica e della biologia delle malattie proliferative, in cui una dinamica alterata dei microtubuli può contribuire a fenotipi associati all’aneuploidia.

Le particelle di attivazione lentivirale KIF2C (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KIF2C in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale KIF2C (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KIF2C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di KIF2C. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KIF2C e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.