Ki67 Plasmide Double Nickase (h): sc-400081-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ki67 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ki67 Double Nickase Plasmid (h) e il Ki67 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MKI67. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ki67 Antibody (Ki-67): sc-23900
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ki67 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400081-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ki67 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400081-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MKI67 codifica Ki67, una proteina nucleare associata alla cromatina ampiamente utilizzata come marcatore del ciclo cellulare attivo, la cui espressione raggiunge il picco durante le fasi S/G2/M ed è assente nelle cellule quiescenti in G0. Ki67 contribuisce all’organizzazione dei cromosomi a livello superiore e sostiene la formazione della periferia dei cromosomi mitotici, aiutando a mantenere una corretta segregazione cromosomica e la dinamica della divisione cellulare. Grazie al suo stretto legame con i programmi proliferativi, Ki67 si interseca con le reti regolatorie del ciclo cellulare ed è spesso impiegata per studiare il controllo della crescita e le risposte allo stress replicativo. Un’espressione deregolata di MKI67 è comunemente associata a stati iperproliferativi in diversi tipi di tumore, a supporto del suo valore negli studi meccanicistici sul controllo del ciclo cellulare e nella biologia del cancro.
Ki67 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MKI67 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MKI67. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MKI67. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MKI67 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.