Plasmide Double Nickase (h) KCTD15: sc-407663-NIC

KCTD15 code une protéine adaptatrice contenant un domaine BTB/POZ de la famille des domaines de tétramérisation des canaux potassiques (KCTD), qui contribue aux interactions protéine–protéine et à la régulation des réseaux de signalisation. KCTD15 a été associé à la modulation de programmes transcriptionnels gouvernant le développement de la crête neurale et l’adipogenèse, et est fréquemment évoqué dans le contexte de circuits régulateurs liés à WNT/β-caténine et des états de différenciation cellulaire. Des études d’association génétique impliquent des loci de KCTD15 dans des traits liés à l’obésité, et une expression altérée de KCTD15 a été rapportée dans divers contextes pertinents pour la régulation métabolique et le neurodéveloppement. Ces propriétés font de KCTD15 une cible utile pour analyser les interactions entre voies, la spécification de lignée et les relations génotype–phénotype dans des modèles cellulaires humains.

KCTD15 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCTD15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCTD15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCTD15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCTD15.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.