KCTD15 Plasmide Double Nickase (h): sc-407663-NIC

KCTD15 codifica una proteina adattatrice contenente un dominio BTB/POZ, appartenente alla famiglia dei domini di tetramerizzazione dei canali del potassio (KCTD), che contribuisce alle interazioni proteina–proteina e alla regolazione delle reti di segnalazione. KCTD15 è stata collegata alla modulazione di programmi trascrizionali che governano lo sviluppo della cresta neurale e l’adipogenesi, ed è spesso discussa nel contesto dei circuiti regolatori legati a WNT/β-catenina e degli stati di differenziazione cellulare. Studi di associazione genetica implicano loci di KCTD15 in tratti correlati all’obesità, e un’espressione alterata di KCTD15 è stata riportata in diversi contesti rilevanti per la regolazione metabolica e lo sviluppo neurologico. Queste caratteristiche rendono KCTD15 un bersaglio utile per analizzare il cross-talk tra vie di segnalazione, la specificazione di linea e le relazioni genotipo-fenotipo in modelli cellulari umani.

KCTD15 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCTD15 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCTD15. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCTD15. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCTD15 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.