JMJD2D Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404743-ACT

Il gene umano **KDM4D** codifica per la demetilasi delle lisine istoniche **JMJD2D**, un enzima con dominio **Jumonji C (JmjC)** che rimuove segni metilici repressivi sull’istone H3, in particolare **H3K9me3/me2**. Rimodellando l’accessibilità della cromatina, JMJD2D influenza programmi trascrizionali legati alle risposte al danno del DNA, al controllo del ciclo cellulare e alla regolazione di geni specifici di linea cellulare. L’attività di KDM4D si intreccia con reti epigenetiche e di segnalazione che governano la stabilità del genoma e la plasticità trascrizionale, processi spesso alterati nel cancro e in altri disturbi caratterizzati da stati della cromatina deregolati. In quanto fattore che modifica la cromatina, JMJD2D è ampiamente studiata per il suo ruolo nel modulare l’attività di enhancer e promotori e nel coordinare l’espressione genica dipendente dal contesto.

JMJD2D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KDM4D senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JMJD2D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KDM4D nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KDM4D, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JMJD2D. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KDM4D nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JMJD2D nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JMJD2D nelle cellule tumorali con espressione di KDM4D silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.