JAK1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400439-ACT

La Janus chinasi 1 (JAK1) è una tirosin-chinasi non recettoriale che trasduce segnali provenienti da molteplici recettori per citochine, inclusi i recettori degli interferoni di tipo I e di tipo II, per regolare le risposte immunitarie innate e adattative. In seguito al legame con il recettore, JAK1 fosforila i fattori di trascrizione STAT, attivando programmi genici che controllano la difesa antivirale, l’infiammazione e la sopravvivenza cellulare, e si integra nelle dinamiche più ampie della rete JAK–STAT, che modulano la sensibilità alle citochine e la regolazione tramite feedback. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di JAK1 sono state associate a una segnalazione citochinica disregolata nei disturbi immunomediati e a fenotipi di evasione immunitaria tumorale attraverso una ridotta risposta agli interferoni. In quanto nodo centrale di segnalazione, JAK1 è ampiamente studiata nei pathway che regolano la biologia delle cellule ematopoietiche ed epiteliali, le risposte allo stress e il cross-talk con la segnalazione MAPK e PI3K/AKT.

JAK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di JAK1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JAK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus JAK1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione JAK1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JAK1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus JAK1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JAK1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JAK1 nelle cellule tumorali con espressione di JAK1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.