ISG15 Plasmide Double Nickase (h): sc-400996-NIC

ISG15 codifica un modificatore di tipo ubiquitina, inducibile dagli interferoni, che viene rapidamente attivato dagli interferoni di tipo I e dallo stress cellulare. La coniugazione di ISG15 ai substrati proteici (ISGilazione) è mediata dall’enzima E1 UBA7, dall’E2 UBE2L6 e da ligasi E3 come HERC5, ed è reversibile grazie alla deISGilasi USP18, integrando ISG15 nelle reti dell’immunità innata e della proteostasi. ISG15 influenza la restrizione antivirale, la regolazione dell’intensità del segnale interferonico e la modulazione della traduzione e del turnover proteico; in alcuni contesti sono state inoltre riportate attività extracellulari di tipo citochinico. La disregolazione di ISG15/ISGilazione è stata associata ad alterazioni delle interazioni ospite–patogeno, interferonopatie, fenotipi infiammatori e segnalazione immunitaria correlata al cancro, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici delle vie dell’interferone.

ISG15 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ISG15 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ISG15. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ISG15. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ISG15 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.