INDOL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403856-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- INDOL1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il INDOL1 Double Nickase Plasmid (h) e il INDOL1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IDO2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
INDOL1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403856-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
INDOL1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403856-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’IDO2 umano (INDOL1) codifica un enzima della famiglia delle indolamina 2,3-diossigenasi che catalizza il metabolismo ossidativo del triptofano lungo la via della chinurenina, influenzando la disponibilità locale di amminoacidi e la produzione di metaboliti bioattivi a valle. Attraverso la regolazione del catabolismo del triptofano, IDO2 può modulare la segnalazione immunitaria, l’equilibrio redox e le risposte cellulari allo stress, con effetti dipendenti dal contesto sulla funzione delle cellule presentanti l’antigene e sulle vie infiammatorie. Alterazioni dell’attività della via della chinurenina e dell’espressione di IDO2 sono state riportate in contesti di infiammazione cronica e disregolazione immunitaria e sono oggetto di studio per le loro associazioni con le interazioni tra tumore e sistema immunitario e con i processi neuroinfiammatori. IDO2 rappresenta quindi un nodo utile per analizzare il controllo metabolico dei fenotipi immunitari e il crosstalk tra vie di segnalazione in modelli cellulari umani.
INDOL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IDO2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IDO2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IDO2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IDO2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.