IL-4I1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420354

Panoramica

Il4i1 codifica per interleukin-4–induced gene 1 (IL-4I1), una L-amminoacido ossidasi secreta espressa dalle cellule presentanti l’antigene e inducibile in microambienti infiammatori e simil-tumorali. IL-4I1 catalizza la deaminazione ossidativa di amminoacidi come la fenilalanina, generando prodotti metabolici tra cui il perossido di idrogeno, in grado di modulare l’equilibrio redox e la segnalazione immunitaria. Attraverso il metabolismo degli amminoacidi e le vie legate allo stress ossidativo, IL-4I1 influenza i programmi delle cellule mieloidi, le soglie di attivazione delle cellule T e circuiti più ampi di immunoregolazione. Un’attività deregolata di IL-4I1 è stata collegata in letteratura a una soppressione immunitaria alterata, infiammazione cronica ed evasione immunitaria associata al cancro, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici di immunometabolismo in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-4I1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Il4i1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Il4i1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Il4i1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-4I1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Il4i1 per lo studio della segnalazione di IL-4I1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Il4i1 critici per la funzione di IL-4I1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Il4i1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-4I1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IL-4I1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Il4i1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-4I1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IL-4I1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Il4i1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Il4i1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.