IFT88 Plasmide Double Nickase (m): sc-423378-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IFT88 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IFT88 Double Nickase Plasmid (m) e il IFT88 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ift88. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IFT88 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423378-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IFT88 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423378-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ift88 codifica la proteina 88 del trasporto intraflagellare (IFT88), un componente centrale del complesso IFT-B necessario per l’assemblaggio del ciglio primario e per il trasporto anterogrado lungo l’assonema. Nelle cellule murine, IFT88 sostiene la ciliogenesi e le vie di segnalazione dipendenti dalle ciglia, tra cui Hedgehog e PDGFRα, che regolano proliferazione, differenziamento e patterning tissutale. L’alterazione di Ift88 compromette la dinamica tra centrosoma e ciglio, modifica gli output di segnalazione meccanosensoriali e dello sviluppo, ed è ampiamente utilizzata per modellare difetti della struttura e della funzione ciliare. Ift88 è quindi un bersaglio di alto valore per studiare le ciliopatie e fenotipi correlati, come lo sviluppo anomalo degli organi, anomalie renali e scheletriche e l’alterazione del patterning sinistra–destra nei sistemi sperimentali.
IFT88 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ift88 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ift88. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ift88. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ift88 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.