IFI-16 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416568-ACT

L’IFI16 umano (IFI-16) è un sensore nucleare del DNA e una proteina inducibile dagli interferoni che contribuisce a coordinare la sorveglianza immunitaria innata di acidi nucleici anomali o estranei. IFI-16 partecipa alla segnalazione dell’interferone dipendente da STING e a risposte associate all’inflammasoma, influenzando programmi trascrizionali legati alla difesa antivirale, al controllo del ciclo cellulare e alla regolazione associata alla cromatina. Attraverso interazioni con i meccanismi di riparazione del danno al DNA e con il macchinario trascrizionale, IFI-16 può modulare le risposte cellulari allo stress e le vie associate alla senescenza. Un’attività disregolata di IFI16 è stata associata a segnalazione infiammatoria, fenotipi di restrizione virale e meccanismi patogenetici di malattie immuno-correlate, rendendola un nodo utile per studiare il sensing degli acidi nucleici e il crosstalk tra le vie dell’interferone.

IFI-16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFI16 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFI-16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFI16 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFI16, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFI-16. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFI16 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFI-16 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFI-16 nelle cellule tumorali con espressione di IFI16 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.