IDH3G Plasmide Double Nickase (h): sc-404994-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IDH3G Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IDH3G Double Nickase Plasmid (h) e il IDH3G Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IDH3G. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IDH3G Antibody (C-5): sc-365489
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IDH3G Plasmide Double Nickase (h) | sc-404994-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IDH3G Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404994-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IDH3G codifica la subunità gamma dell’isocitrato deidrogenasi 3 mitocondriale NAD-dipendente (IDH3), un enzima chiave del ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA) che catalizza la decarbossilazione ossidativa dell’isocitrato ad α-chetoglutarato, generando al contempo NADH per la fosforilazione ossidativa. Influenzando l’equilibrio redox mitocondriale e il flusso di carbonio attraverso il metabolismo centrale, IDH3G contribuisce all’omeostasi energetica, all’anaplerosi e alla disponibilità di precursori biosintetici. L’alterazione della funzione del complesso IDH3 è stata collegata a disregolazione metabolica e a modifiche della respirazione mitocondriale, processi spesso rimodellati in stati cellulari proliferativi e adattati allo stress. In quanto nodo metabolico mitocondriale, IDH3G è studiato nel contesto della bioenergetica, della gestione delle specie reattive dell’ossigeno e del rimaneggiamento metabolico rilevante per diversi fenotipi associati a malattia.
IDH3G Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IDH3G nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IDH3G. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IDH3G. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IDH3G interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.