Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Id4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401380-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Id4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Id4 Double Nickase Plasmid (h) e il Id4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ID4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Id4 Antibody (B-5): sc-365656
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Id4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401380-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Id4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401380-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ID4 (inibitore del legame al DNA 4) codifica una proteina helix–loop–helix che è priva di un dominio di legame al DNA e modula la trascrizione sequestrando fattori HLH basici, influenzando così l’impegno di linea e i programmi di differenziamento cellulare. Nelle cellule umane, Id4 è collegato alla regolazione della progressione del ciclo cellulare, a processi di neurosviluppo e al differenziamento epiteliale, integrandosi con reti trascrizionali più ampie guidate dai bHLH. Un’espressione alterata di ID4 o una sua regolazione epigenetica è stata riportata in molteplici tipi di tumore, dove è associata a cambiamenti nella proliferazione, nell’invasività e in fenotipi di tipo staminale, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici. In quanto regolatore dipendente dal contesto, ID4 viene spesso analizzato per il suo impatto su vie di sviluppo e stati di segnalazione oncogenica in modelli cellulari.
Id4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ID4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ID4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ID4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ID4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.