Plasmide Double Nickase (h) Id4: sc-401380-NIC

ID4 (inhibiteur de la liaison à l’ADN 4) code une protéine à domaine hélice–boucle–hélice dépourvue de domaine de liaison à l’ADN et module la transcription en séquestrant des facteurs HLH basiques, influençant ainsi l’engagement de lignée et les programmes de différenciation cellulaire. Dans les cellules humaines, Id4 est associé à la régulation de la progression du cycle cellulaire, à des processus de neurodéveloppement et à la différenciation épithéliale, en s’intégrant à des réseaux transcriptionnels plus larges pilotés par les bHLH. Une expression d’ID4 altérée ou une régulation épigénétique anormale a été rapportée dans de multiples types de tumeurs, où elle est liée à des changements de prolifération, d’invasion et de phénotypes de type « stem », ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques. En tant que régulateur dépendant du contexte, ID4 est fréquemment étudié pour son impact sur les voies du développement et les états de signalisation oncogénique dans des modèles cellulaires.

Id4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ID4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ID4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ID4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ID4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.