HRASLS2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412404-ACT

HRASLS2 (HRAS-like suppressor 2), noto anche come H-rev107-3, codifica un enzima associato alla membrana con attività di fosfolipasi A1/2 e di aciltransferasi, che rimodella la composizione dei fosfolipidi e influenza la segnalazione mediata dai lipidi. Regolando il rilascio di acidi grassi e il turnover dei fosfolipidi, HRASLS2 può incidere sulla dinamica delle membrane, sul traffico vescicolare e sulle risposte cellulari legate al controllo della crescita e alla differenziazione. L’alterazione dell’espressione di HRASLS2 è stata studiata nel contesto delle reti di segnalazione oncogeniche e della riprogrammazione del metabolismo lipidico, in cui cambiamenti dell’omeostasi dei lipidi di membrana possono modulare vie proliferative e di risposta allo stress. La sua connessione funzionale con fenotipi cellulari associati a Ras la rende rilevante per studi meccanicistici di biologia tumorale, metabolismo e transizioni di stato cellulare.

HRASLS2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HRASLS2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HRASLS2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HRASLS2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HRASLS2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HRASLS2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HRASLS2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HRASLS2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HRASLS2 nelle cellule tumorali con espressione di HRASLS2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.