HoxD12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407472

Panoramica

HOXD12 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxD12, membro del cluster HOXD che contribuisce a stabilire l’identità posizionale durante lo sviluppo embrionale e coordina la formazione degli arti e dello scheletro assiale. In quanto regolatore che si lega al DNA, HoxD12 si integra con reti regolatorie HOX più ampie e con il controllo a livello della cromatina per modellare programmi trascrizionali specifici di tessuto che governano differenziamento e morfogenesi. Un’espressione deregolata di HOXD12 o alterazioni della regolazione del cluster HOX sono state associate ad anomalie dello sviluppo e sono state riportate in firme trascrizionali di diversi tumori, a riflesso del suo ruolo nel controllo di reti geniche legate a linea cellulare e crescita. In contesti adulti e patologici, un’attività alterata di HOXD12 può influenzare transizioni dello stato cellulare, programmi di migrazione e la riattivazione di vie di sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxD12 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HOXD12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HOXD12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HOXD12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HoxD12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HOXD12 per lo studio della segnalazione di HoxD12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HOXD12 critici per la funzione di HoxD12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HOXD12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HoxD12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HoxD12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HOXD12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HoxD12 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HoxD12 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HOXD12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HOXD12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.