Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxA9: sc-401583-ACT

HOXA9 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA9, un régulateur clé de l’organisation embryonnaire selon l’axe antéro-postérieur et de la spécification des lignées hématopoïétiques. Dans les cellules humaines, HoxA9 contrôle des programmes d’expression génique qui régissent l’auto-renouvellement des cellules souches/progénitrices, la différenciation et la progression du cycle cellulaire via des réseaux de régulation HOX/MEIS et un contrôle transcriptionnel associé à la chromatine. Une expression dérégulée de HOXA9 est fortement associée à une différenciation myéloïde aberrante et à des états transcriptionnels leucémogènes, ce qui en fait une cible largement étudiée en biologie des hémopathies malignes. Les voies dépendantes de HOXA9 sont également utilisées pour modéliser la régulation des gènes du développement, le remodelage épigénétique et la coopération oncogénique dans des systèmes pilotés par des facteurs de transcription.

HoxA9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXA9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxA9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXA9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXA9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxA9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXA9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxA9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxA9 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXA9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.