HoxA9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401583-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HoxA9 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- HoxA9 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal HoxA9 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal HoxA9 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di HOXA9. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HoxA9 Antibody (HOX5I043): sc-81291
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HoxA9 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-401583-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
HoxA9 Plasmide di attivazione CRISPR (h2) | sc-401583-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
HOXA9 codifica il fattore di trascrizione omeobox HoxA9, un regolatore chiave della definizione dell’asse antero-posteriore durante lo sviluppo embrionale e della specificazione delle linee ematopoietiche. Nelle cellule umane, HoxA9 controlla programmi di espressione genica che governano l’auto-rinnovamento delle cellule staminali/progenitrici, la differenziazione e la progressione del ciclo cellulare attraverso reti regolatorie HOX/MEIS e meccanismi di controllo trascrizionale associati alla cromatina. Un’espressione deregolata di HOXA9 è fortemente associata a una differenziazione mieloide aberrante e a stati trascrizionali leucemogenici, rendendolo un nodo ampiamente studiato nella biologia delle neoplasie ematologiche. Le vie dipendenti da HOXA9 vengono inoltre utilizzate per modellare la regolazione genica dello sviluppo, il rimodellamento epigenetico e la cooperazione oncogenica in sistemi guidati da fattori di trascrizione.
HoxA9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HOXA9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
HoxA9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HOXA9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HOXA9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxA9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HOXA9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxA9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxA9 nelle cellule tumorali con espressione di HOXA9 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.