Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400659-ACT

HDAC5 codifica l’istone deacetilasi 5, una HDAC di classe IIa che modula l’accessibilità della cromatina e la trascrizione regolando la dinamica dell’acetilazione delle lisine in collaborazione con repressori trascrizionali e co-regolatori. L’attività di HDAC5 è strettamente controllata dallo shuttling nucleo-citoplasmatico dipendente dalla fosforilazione, collegando i segnali del calcio e delle chinasi a programmi genici che governano la miogenesi, la plasticità neuronale e l’adattamento metabolico. Attraverso interazioni con fattori quali i regolatori trascrizionali della famiglia MEF2, HDAC5 contribuisce a coordinare le reti di differenziamento e i circuiti trascrizionali responsivi allo stress. Un’espressione o una localizzazione deregolata di HDAC5 è stata associata ad alterazioni degli stati epigenetici in oncologia, nonché a vie rilevanti per il rimodellamento cardiaco e per i meccanismi delle malattie neurodegenerative.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HDAC5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HDAC5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HDAC5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Histone Deacetylase 5 (HDAC5). A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HDAC5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Histone Deacetylase 5 (HDAC5) nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Histone Deacetylase 5 (HDAC5) nelle cellule tumorali con espressione di HDAC5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.