Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone Deacetylase 5 (HDAC5): sc-400659-ACT

HDAC5 code l’histone désacétylase 5, une HDAC de classe IIa qui module l’accessibilité de la chromatine et la transcription en régulant la dynamique d’acétylation des lysines, en concertation avec des répresseurs transcriptionnels et des corégulateurs. L’activité de HDAC5 est étroitement contrôlée par une navette nucleo-cytoplasmique dépendante de la phosphorylation, reliant les signaux calciques et des kinases à des programmes géniques gouvernant la myogenèse, la plasticité neuronale et l’adaptation métabolique. Grâce à des interactions avec des facteurs tels que les régulateurs transcriptionnels de la famille MEF2, HDAC5 contribue à coordonner la différenciation et des réseaux transcriptionnels sensibles au stress. Une expression ou une localisation dérégulée de HDAC5 a été associée à des états épigénétiques altérés en oncologie ainsi qu’à des voies impliquées dans le remodelage cardiaque et dans des mécanismes de maladies neurodégénératives.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HDAC5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 5 (HDAC5) Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HDAC5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HDAC5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 5 (HDAC5). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HDAC5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 5 (HDAC5) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 5 (HDAC5) dans les cellules tumorales présentant une expression de HDAC5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.