Hepsin Plasmide Double Nickase (h): sc-405081-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Hepsin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Hepsin Double Nickase Plasmid (h) e il Hepsin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HPN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Hepsin Antibody (2D5): sc-517056
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Hepsin Plasmide Double Nickase (h) | sc-405081-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hepsin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405081-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HPN codifica per l’hepsina, una proteasi serinica transmembrana di tipo II arricchita sulla superficie cellulare, dove partecipa alla proteolisi pericellulare, al rimodellamento della matrice extracellulare e alla regolazione delle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice. L’hepsina può influenzare la segnalazione attivata da proteasi e la disponibilità di fattori di crescita attraverso il processamento di substrati extracellulari, collegandosi così a vie che modellano la differenziazione epiteliale, l’architettura tissutale e il comportamento invasivo. Un’espressione deregolata di HPN e alterazioni dell’attività dell’hepsina sono state riportate in molte neoplasie epiteliali, rendendolo un utile strumento molecolare per studiare le reti di proteasi associate al tumore e il crosstalk con il microambiente. Nella ricerca biomedica, HPN viene spesso analizzato per i suoi ruoli nelle cascate di proteasi ancorate alla membrana, nella migrazione cellulare e nella proteostasi a livello della membrana plasmatica.
Hepsin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HPN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HPN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HPN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HPN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.