HECTD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406532

Panoramica

HECTD3 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio HECT che catalizza il trasferimento di ubiquitina su proteine bersaglio, influenzandone stabilità, localizzazione e output di segnalazione. È stata collegata alla regolazione della segnalazione immunitaria innata e infiammatoria, inclusa la modulazione di vie associate a NF-κB e agli interferoni tramite un controllo ubiquitina-dipendente dei componenti della via. Regolando la proteostasi e la trasduzione del segnale, HECTD3 può influenzare le risposte cellulari allo stress, la proliferazione e l’apoptosi. Programmi di ubiquitinazione deregolati che coinvolgono HECTD3 sono stati associati a fenotipi legati al cancro e a meccanismi di malattie immuno-mediate, a supporto del suo impiego in modelli per la dissezione delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HECTD3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HECTD3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HECTD3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HECTD3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HECTD3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HECTD3 per lo studio della segnalazione di HECTD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HECTD3 critici per la funzione di HECTD3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HECTD3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HECTD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HECTD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HECTD3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HECTD3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HECTD3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HECTD3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HECTD3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.