GTBP Plasmide Double Nickase (m): sc-421718-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GTBP Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GTBP Double Nickase Plasmid (m) e il GTBP Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Msh6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GTBP Antibody (E-8): sc-137015
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GTBP Plasmide Double Nickase (m) | sc-421718-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GTBP Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421718-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Msh6 del topo codifica GTBP, un componente centrale del complesso di riconoscimento dei mismatch MutSα insieme a MSH2, che rileva appaiamenti errati base–base e loop di inserzione/delezione che si formano durante la replicazione e la ricombinazione del DNA. Avviando la riparazione dei mismatch del DNA, GTBP contribuisce a mantenere la stabilità del genoma, sopprime l’accumulo di mutazioni e si integra con i processi di riparazione accoppiati alla replicazione e con la segnalazione del danno. L’alterazione di Msh6 compromette la fedeltà della riparazione dei mismatch, aumenta l’instabilità dei microsatelliti e modifica le risposte cellulari allo stress replicativo. Nella ricerca biomedica, Msh6/GTBP è ampiamente utilizzato per studiare i meccanismi della mutagenesi e le relazioni genotipo–fenotipo nelle vie di riparazione del DNA associate al cancro.
GTBP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Msh6 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Msh6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Msh6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Msh6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.