G_{β 5} Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420611

Panoramica

Gnb5 codifica la subunità Gβ5, una componente atipica della proteina G beta che forma complessi obbligati con le proteine RGS della famiglia R7 per accelerare l’idrolisi del GTP su Gα e rendere più netta la terminazione del segnale dei GPCR. Nelle cellule di topo, gli assemblaggi Gβ5–RGS regolano la cinetica e l’ampiezza della segnalazione legata a cAMP e Ca²⁺ a valle di recettori per neurotrasmettitori e recettori sensoriali, modellando l’eccitabilità neuronale e la trasmissione sinaptica. Attraverso il controllo delle vie guidate dai GPCR, Gβ5 influenza processi di segnalazione a livello di rete, inclusi la neuromodulazione e l’adattamento agli stimoli. La disregolazione della segnalazione associata a GNB5 è stata collegata a fenotipi neuroevolutivi e sensoriali, a supporto della sua rilevanza negli studi meccanicistici sulla temporizzazione dei GPCR e sulla funzione dei circuiti neuronali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Gβ 5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gnb5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gnb5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gnb5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Gβ 5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gnb5 per lo studio della segnalazione di Gβ 5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gnb5 critici per la funzione di Gβ 5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gnb5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Gβ 5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Gβ 5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gnb5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Gβ 5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Gβ 5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gnb5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gnb5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.