G_{α i-2} Plasmide Double Nickase (h): sc-400568-NIC

GNAI2 codifica la subunità alfa Gαi-2 della proteina G eterotrimerica umana, un trasduttore di segnale regolato da GDP/GTP che collega i GPCR attivati all’inibizione dell’adenilato ciclasi e alla riduzione della produzione di cAMP. Attraverso l’accoppiamento a vie dipendenti dai GPCR, Gαi-2 modella la segnalazione mediata da PKA, la regolazione dei canali ionici, gli output della MAPK e i processi dipendenti da PI3K, influenzando chemotassi, secrezione e risposte proliferative in diversi tipi cellulari. L’attività di GNAI2 è inoltre integrata con la desensibilizzazione e il traffico dei recettori tramite la segnalazione di Gβγ e le reti GRK/β-arrestina, contribuendo a determinare ampiezza e durata del segnale. Una segnalazione deregolata di Gαi-2 è stata associata ad alterazioni della migrazione delle cellule immunitarie e a contesti di segnalazione della crescita aberranti, sostenendone lo studio in meccanismi legati a infiammazione e oncogenesi senza implicare un’utilità clinica.

Gα i-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GNAI2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GNAI2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GNAI2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GNAI2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.