G_{α i-2} Double Nickaseプラスミド (h): sc-400568-NIC

GNAI2は、ヒトのヘテロ三量体Gタンパク質のαサブユニットであるGαi-2をコードしており、GDP/GTPによって制御されるシグナル伝達因子として、活性化されたGPCR（Gタンパク質共役受容体）をアデニリルシクラーゼの抑制およびcAMP産生の低下へと結び付けます。GPCR依存性経路とのカップリングを介して、Gαi-2はPKAシグナル、イオンチャネル制御、MAPK出力、PI3K依存性プロセスを形成し、さまざまな細胞種における走化性、分泌、増殖応答に影響を与えます。GNAI2の活性は、GβγシグナルおよびGRK/β-アレスチンネットワークを介した受容体の脱感作とトラフィッキングとも統合されており、シグナルの強度と持続時間の設定に寄与します。Gαi-2シグナルの制御異常は、免疫細胞の遊走変化や異常な増殖シグナルの状況と関連づけられており、臨床的有用性を示唆するものではないものの、炎症および腫瘍形成に関連する機構の研究対象として支持されています。

Gα i-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GNAI2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GNAI2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GNAI2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GNAI2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。