Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Gα 15 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-403266-KO-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Gα 15 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h2) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Gα 15, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Gα 15 Antibody (F-3): sc-393878
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Gα 15 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2) | sc-403266-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
GNA15 codifica la subunità alfa Gα15 della proteina G eterotrimerica umana, un mediatore promiscuo della famiglia Gq che accoppia diversi recettori accoppiati a proteine G (GPCR) all’attivazione della fosfolipasi Cβ. In seguito all’attivazione recettoriale, Gα15 promuove la segnalazione tramite inositolo trifosfato e diacilglicerolo, la mobilizzazione del Ca²⁺ intracellulare, l’attività della protein chinasi C e programmi trascrizionali a valle che modellano secrezione, chemiotassi e risposte infiammatorie. Questo asse di segnalazione interagisce con la via MAPK e con altre vie di secondi messaggeri, influenzando gli stati di attivazione cellulare in contesti immunitari ed ematopoietici. Un accoppiamento alterato GPCR–Gα15 e una segnalazione calcio-dipendente deregolata sono stati implicati in fenotipi associati a cancro e infiammazione, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sul “rewiring” recettoriale e sull’integrazione dei segnali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Gα 15 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GNA15 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GNA15 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GNA15 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Gα 15.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GNA15 per lo studio della segnalazione di Gα 15, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni GNA15 critici per la funzione di Gα 15
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GNA15 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Gα 15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Gα 15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GNA15. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Gα 15 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Gα 15 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GNA15 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GNA15 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.