group IVE sPLA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-417296-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- group IVE sPLA2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il group IVE sPLA2 Double Nickase Plasmid (h) e il group IVE sPLA2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PLA2G4E. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
group IVE sPLA2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417296-NIC | 20 µg | $410.00 |
PLA2G4E codifica la fosfolipasi A2 secretoria (sPLA2) del gruppo IVE, un enzima che idrolizza i glicerofosfolipidi di membrana generando acidi grassi liberi e lisofosfolipidi, che agiscono come secondi messaggeri lipidici. Regolando la disponibilità di acido arachidonico, PLA2G4E influenza la biosintesi degli eicosanoidi e si inserisce nei processi di segnalazione infiammatoria, rimodellamento delle membrane e metabolismo lipidico in risposta allo stress. Alterazioni dell’attività fosfolipasica e del bilanciamento dei mediatori lipidici a valle sono state associate a fisiopatologie legate all’infiammazione e a reti di segnalazione associate ai tumori, rendendo PLA2G4E un bersaglio utile per studi meccanicistici in immunologia e biologia del cancro. Il suo ruolo nel modellare la composizione lipidica locale supporta inoltre indagini su traffico vescicolare, funzione di barriera e transizioni di stato cellulare.
group IVE sPLA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PLA2G4E nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PLA2G4E. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PLA2G4E. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PLA2G4E interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.