GPR92 Plasmide Double Nickase (m): sc-436329-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR92 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR92 Double Nickase Plasmid (m) e il GPR92 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lpar5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR92 Plasmide Double Nickase (m) | sc-436329-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR92 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-436329-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lpar5 codifica il recettore murino dell’acido lisofosfatidico GPR92, un GPCR di classe A che trasduce segnali lipidici extracellulari in risposte intracellulari basate su secondi messaggeri. Una volta attivato, GPR92 può interagire con proteine G eterotrimeriche per regolare la produzione di cAMP, la segnalazione della fosfolipasi C con mobilizzazione di Ca²⁺ e l’attività a valle della via MAPK/ERK, influenzando migrazione cellulare, sopravvivenza e programmi di espressione genica infiammatoria. La segnalazione LPA–GPR92 è stata collegata alla comunicazione neuro-immunitaria e alle risposte infiammatorie periferiche, e la disregolazione della segnalazione lipidica mediata da GPCR è rilevante in modelli di dolore, attivazione immunitaria e rimodellamento tissutale. Queste caratteristiche rendono Lpar5 un bersaglio utile per studiare la biologia dei mediatori lipidici e le reti di segnalazione dipendenti da GPCR nei sistemi murini.
GPR92 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lpar5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lpar5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lpar5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lpar5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.