GPR56 Plasmide Double Nickase (m): sc-420657-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GPR56 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GPR56 Double Nickase Plasmid (m) e il GPR56 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Adgrg1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GPR56 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420657-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR56 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420657-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Adgrg1 codifica il recettore di adesione accoppiato a proteine G GPR56 (ADGRG1), un recettore di membrana che integra i segnali della matrice extracellulare con la segnalazione intracellulare per regolare l’adesione, la migrazione e la polarità cellulare. GPR56 viene processato in frammenti N- e C-terminali e può accoppiarsi a proteine G eterotrimeriche, influenzando vie legate alla dinamica del citoscheletro, alla meccanotrasduzione e al patterning dello sviluppo. Nei sistemi murini, Adgrg1 è ampiamente utilizzato per studiare lo sviluppo neurale e gliale, nonché il comportamento delle cellule immunitarie, in cui l’adesione e la motilità mediate dal recettore sono determinanti chiave dell’organizzazione tissutale. Un’attività deregolata di GPR56 è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e legati alla mielinizzazione, ed è frequentemente esaminata in contesti in cui alterate interazioni cellula–matrice contribuiscono a una biologia rilevante per la malattia.
GPR56 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Adgrg1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Adgrg1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Adgrg1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Adgrg1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.