Plasmide CRISPR d'Activation (h) GnT-IVA: sc-407146-ACT

Le gène humain **MGAT4A** code la **N‑acétylglucosaminyltransférase IVa (GnT‑IVA)**, une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui ajoute des ramifications de **N‑acétylglucosamine** liées en **β1,4** aux N‑glycanes complexes. Cette étape enzymatique contribue à la ramification des N‑glycanes, susceptible de moduler le repliement et le trafic des protéines, la rétention des récepteurs à la surface cellulaire et la dynamique de la signalisation en aval. La glycosylation dépendante de **MGAT4A** s’inscrit dans des réseaux plus larges de biosynthèse des glycannes qui influencent les interactions cellule‑cellule, la détection des nutriments et la régulation des récepteurs membranaires. Une N‑glycosylation dérégulée et des profils de ramification modifiés impliquant **MGAT4A** ont été étudiés dans des contextes de dysfonction métabolique et de glycophenotypes associés au cancer, ce qui étaye son utilisation dans la recherche mécanistique sur les voies biologiques et la découverte de biomarqueurs.

GnT-IVA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MGAT4A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GnT-IVA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MGAT4A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MGAT4A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GnT-IVA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MGAT4A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GnT-IVA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GnT-IVA dans les cellules tumorales présentant une expression de MGAT4A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.