Giantin Plasmide Double Nickase (h): sc-418145-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Giantin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Giantin Double Nickase Plasmid (h) e il Giantin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GOLGB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Giantin Antibody (2388C3a): sc-81279
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Giantin Plasmide Double Nickase (h) | sc-418145-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Giantin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418145-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOLGB1 codifica Giantin, una grande golgina a coiled-coil che si ancora alle membrane dell’apparato di Golgi e contribuisce a organizzare l’architettura del Golgi catturando vescicole di trasporto e coordinando eventi di tethering. Giantin sostiene il traffico dal reticolo endoplasmatico (ER) al Golgi e quello intra-Golgi, contribuisce alla glicosilazione e all’omeostasi della via secretoria, e influenza l’organizzazione spaziale degli enzimi del Golgi necessari per la processazione delle proteine. L’alterazione della funzione delle golgine, inclusa la manutenzione del Golgi dipendente da Giantin, è associata a una secrezione modificata della matrice extracellulare, a risposte allo stress nella via secretoria e a fenotipi rilevanti per la ciliogenesi e la morfogenesi dei tessuti. In quanto regolatore strutturale e del traffico, Giantin è ampiamente utilizzato negli studi di biologia cellulare sull’integrità del Golgi, la dinamica delle vescicole e la maturazione proteica nelle cellule umane.
Giantin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GOLGB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GOLGB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GOLGB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GOLGB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.