GHR Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420549-LAC

Il gene murino **Ghr** codifica il recettore dell’ormone della crescita (GHR), un recettore citochinico a singolo passaggio di membrana che media la segnalazione endocrina e paracrina dell’ormone della crescita in fegato, tessuto adiposo, muscolo scheletrico e cellule immunitarie. Il legame del ligando promuove la dimerizzazione del recettore e l’attivazione di JAK2, con conseguente attivazione delle vie a valle STAT5, PI3K–AKT e MAPK/ERK, coordinando la crescita somatica, il metabolismo dei lipidi e del glucosio e il rimodellamento tissutale. I programmi trascrizionali dipendenti da GHR regolano componenti dell’asse IGF ed enzimi metabolici, collegando l’attività del recettore all’omeostasi energetica dell’organismo. Una segnalazione GHR deregolata è stata utilizzata nella ricerca biomedica per modellare fenotipi di crescita alterati, disfunzioni metaboliche epatiche e del tessuto adiposo e cambiamenti nelle vie infiammatorie.

Le particelle di attivazione lentivirale GHR (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Ghr in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GHR (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Ghr, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GHR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Ghr e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.