Gfi-1B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403883-ACT

GFI1B codifica il repressore trascrizionale Gfi-1B, una proteina a dita di zinco essenziale per lo sviluppo ematopoietico e la specificazione di linea, in particolare nei programmi eritroide e megacariocitico. Attraverso interazioni con complessi che modificano la cromatina, come LSD1/RCOR/HDAC, Gfi-1B modella reti trascrizionali che regolano proliferazione, differenziamento e maturazione dei progenitori. La sua attività si integra con i principali regolatori dell’ematopoiesi per controllare programmi di espressione genica coinvolti nella formazione delle piastrine e nello sviluppo dei globuli rossi. Un’espressione o una funzione deregolata di GFI1B è stata associata a disordini piastrinici ereditari e a più ampie alterazioni dell’omeostasi ematopoietica rilevanti per la ricerca sulle neoplasie delle cellule del sangue.

Gfi-1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GFI1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Gfi-1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GFI1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GFI1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Gfi-1B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GFI1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Gfi-1B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Gfi-1B nelle cellule tumorali con espressione di GFI1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.