GFAT2 Plasmide Double Nickase (h): sc-406546-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GFAT2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GFAT2 Double Nickase Plasmid (h) e il GFAT2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GFPT2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GFAT2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406546-NIC | 20 µg | $410.00 |
GFPT2 codifica la glutammina–fruttosio-6-fosfato amidotransferasi 2 (GFAT2), l’enzima limitante della via biosintetica dell’esosamina che converte fruttosio-6-fosfato e glutammina in glucosammina-6-fosfato. Controllando il flusso verso la produzione di UDP-GlcNAc, GFAT2 influenza la N- e O-GlcNAcilazione delle proteine, il reindirizzamento della glicolisi e le risposte di sensing dei nutrienti che collegano la disponibilità di glucosio e glutammina alla segnalazione cellulare. Un’alterata attività della via dell’esosamina è stata associata a riprogrammazione metabolica, regolazione della matrice extracellulare e programmi trascrizionali adattativi allo stress, rilevanti per fenotipi cellulari legati al diabete, per la fibrosi e per la biologia tumorale. Nelle cellule umane, GFPT2 rappresenta quindi un nodo utile per studiare come una regolazione dipendente dalla glicosilazione influenzi proliferazione, differenziamento e segnalazione infiammatoria.
GFAT2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GFPT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GFPT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GFPT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GFPT2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.