Plasmide CRISPR/Cas9 KO GCM1 (m): sc-420510

Présentation

Gcm1 code le facteur de transcription GCM1, un régulateur se liant à l’ADN indispensable à la différenciation des trophoblastes placentaires et à la formation du labyrinthe au cours du développement chez la souris. GCM1 contrôle des programmes géniques impliqués dans la spécification du destin cellulaire, la formation du syncytiotrophoblaste et la morphogenèse de branchement, en coordonnant l’expression de voies qui régissent la fusion cellulaire, les échanges nutritifs et la maturation de l’interface vasculaire. Une activité de GCM1 dérégulée est associée à une placentation anormale et à une croissance fœtale altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des troubles du développement et de la physiopathologie placentaire. Outre son rôle dans le développement, les réseaux transcriptionnels dépendants de GCM1 constituent un système exploitable pour disséquer la régulation des gènes spécifique de lignée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GCM1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gcm1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gcm1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gcm1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GCM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gcm1 pour l'étude de la signalisation de GCM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gcm1 essentiels à la fonction de GCM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gcm1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GCM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GCM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gcm1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GCM1 plasmide HDR (m) et le GCM1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gcm1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gcm1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.