GCM1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420510

Panoramica

Gcm1 codifica per il fattore di trascrizione GCM1, un regolatore legante il DNA essenziale per la differenziazione del trofoblasto placentare e per la formazione del labirinto durante lo sviluppo del topo. GCM1 controlla programmi genici coinvolti nella specificazione del destino cellulare, nella formazione del sinciziotrofoblasto e nella morfogenesi ramificata, coordinando l’espressione di vie che governano la fusione cellulare, lo scambio di nutrienti e la maturazione dell’interfaccia vascolare. Un’attività di GCM1 deregolata è associata a placentazione anomala e a una crescita fetale compromessa, rendendolo rilevante per gli studi sui disturbi dello sviluppo e sulla fisiopatologia placentare. Oltre al suo ruolo nello sviluppo, le reti trascrizionali dipendenti da GCM1 costituiscono un sistema accessibile per analizzare la regolazione genica specifica di linea.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GCM1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gcm1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gcm1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gcm1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GCM1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gcm1 per lo studio della segnalazione di GCM1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gcm1 critici per la funzione di GCM1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gcm1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GCM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GCM1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gcm1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GCM1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GCM1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gcm1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gcm1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.