FSTL5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407972-ACT

FSTL5 (follistatin-like 5) codifica una glicoproteina extracellulare secreta, implicata nella modulazione delle interazioni cellula–cellula e cellula–matrice e dei programmi di segnalazione che influenzano la differenziazione e il rimodellamento tissutale. In quanto proteina contenente un dominio tipo follistatina, FSTL5 viene studiata nel contesto del crosstalk regolatorio con le vie dei fattori di crescita, inclusi i processi correlati a TGF-β/BMP, e nel controllo più ampio dell’adesione e della motilità cellulari. Un’alterata espressione di FSTL5 è stata riportata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, tra cui la biologia del cancro e la ricerca neuroevolutiva o neuropsichiatrica, dove viene utilizzata come marcatore molecolare e nodo funzionale nelle analisi di pathway. Queste proprietà rendono FSTL5 un bersaglio utile per interrogare le reti di segnalazione extracellulare e le dipendenze di regolazione genica in modelli cellulari umani.

FSTL5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FSTL5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FSTL5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FSTL5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FSTL5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FSTL5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FSTL5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FSTL5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FSTL5 nelle cellule tumorali con espressione di FSTL5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.