Plasmide CRISPR d'Activation (m) FSHR: sc-420414-ACT

Le gène murin *Fshr* code le récepteur de l’hormone folliculo-stimulante (FSHR), un RCPG sensible aux gonadotrophines fortement enrichi dans les cellules de la granulosa ovarienne et les cellules de Sertoli testiculaires, où il transmet les signaux de la FSH afin de réguler la gamétogenèse et la fonction endocrinienne de la reproduction. Après liaison du ligand, FSHR active principalement la signalisation AMPc/PKA médiée par Gαs et peut interagir avec les voies MAPK/ERK et PI3K/AKT pour contrôler la stéroïdogenèse, la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la survie. L’activité de Fshr/FSHR influence le développement folliculaire, l’expression de l’aromatase et la maturation du microenvironnement gonadique, ce qui en fait un nœud clé des programmes transcriptionnels sensibles aux hormones. Une signalisation FSHR dérégulée ou une expression anormale du récepteur est pertinente dans des modèles de subfertilité/infertilité, de dysfonctionnement ovarien et de modifications de la physiologie gonadique dépendantes des hormones.

FSHR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fshr sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FSHR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fshr dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fshr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FSHR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fshr natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FSHR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FSHR dans les cellules tumorales présentant une expression de Fshr silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.