Freud-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408241-ACT

Il gene umano **CC2D1A** codifica **Freud-1**, una proteina regolatoria contenente domini **coiled-coil** e **C2** che agisce come modulatore trascrizionale legante il DNA e come scaffold di segnalazione. Freud-1 è stato collegato al controllo di programmi genici serotoninergici e dopaminergici, inclusa la regolazione dei promotori di geni recettoriali, e partecipa a processi cellulari quali l’equilibrio tra repressione/attivazione della trascrizione, la differenziazione neuronale e la segnalazione sinaptica. CC2D1A interseca inoltre vie di segnalazione associate alla membrana, incluse quelle correlate ad **Akt**, in linea con ruoli nella sopravvivenza cellulare e nelle risposte allo stress. Alterazioni dell’attività di CC2D1A/Freud-1 sono state associate a fenotipi neurosviluppativi e neuropsichiatrici, a supporto della sua rilevanza negli studi meccanicistici della regolazione genica neuronale.

Freud-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CC2D1A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Freud-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CC2D1A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CC2D1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Freud-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CC2D1A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Freud-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Freud-1 nelle cellule tumorali con espressione di CC2D1A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.