FHOD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432529

Panoramica

Fhod3 codifica FHOD3, una formina correlata a diaphanous che nuclea ed elongata filamenti lineari di actina, sostenendo il rimodellamento del citoscheletro di actina e l’organizzazione contrattile. Nel muscolo striato del topo, FHOD3 è arricchita nelle strutture sarcomeriche e contribuisce all’assemblaggio delle miofibrille, alla formazione delle fibre da stress e al mantenimento dell’architettura cellulare attraverso dinamiche dell’actina regolate dalle GTPasi Rho. Questi processi si intersecano con vie che controllano la meccanotrasduzione, la forma cellulare e la trasmissione intracellulare delle forze, rendendo FHOD3 un nodo utile per lo studio dell’omeostasi del citoscheletro. Un’organizzazione dell’actina e un’integrità del sarcomero disregolate sono associate a fenotipi di cardiomiopatia e disfunzione muscolare, collocando Fhod3 come un bersaglio rilevante per modellare in vitro i meccanismi delle malattie strutturali di cuore e muscolo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FHOD3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fhod3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fhod3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fhod3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FHOD3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fhod3 per lo studio della segnalazione di FHOD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fhod3 critici per la funzione di FHOD3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fhod3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FHOD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FHOD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fhod3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FHOD3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FHOD3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fhod3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fhod3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.