Plasmide CRISPR/Cas9 KO FHOD3 (m): sc-432529

Présentation

Fhod3 code pour FHOD3, une formine apparentée à Diaphanous qui initie la nucléation et l’élongation de filaments d’actine linéaires, soutenant le remodelage du cytosquelette d’actine et l’organisation contractile. Dans le muscle strié de souris, FHOD3 est enrichie au niveau des structures sarcomériques et contribue à l’assemblage des myofibrilles, à la formation de fibres de stress et au maintien de l’architecture cellulaire via une dynamique de l’actine régulée par les GTPases Rho. Ces processus recoupent des voies qui contrôlent la mécanotransduction, la forme cellulaire et la transmission intracellulaire des forces, faisant de FHOD3 un nœud utile pour étudier l’homéostasie du cytosquelette. Une organisation de l’actine dérégulée et une intégrité sarcomérique altérée sont associées à des phénotypes de cardiomyopathie et de dysfonction musculaire, ce qui fait de Fhod3 une cible pertinente pour modéliser in vitro les mécanismes des maladies structurales du cœur et du muscle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FHOD3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fhod3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fhod3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fhod3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FHOD3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fhod3 pour l'étude de la signalisation de FHOD3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fhod3 essentiels à la fonction de FHOD3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fhod3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FHOD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FHOD3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fhod3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FHOD3 plasmide HDR (m) et le FHOD3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fhod3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fhod3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.