FHL-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403541

Panoramica

FHL1 codifica la proteina 1 con domini LIM “four-and-a-half” (FHL-1), una proteina adattatrice composta esclusivamente da domini LIM, arricchita nel muscolo striato, che funge da impalcatura per complessi multiproteici a livello del sarcomero e del costamero. FHL-1 coordina l’organizzazione del citoscheletro, la meccanotrasduzione e gli output trascrizionali collegando proteine strutturali a nodi di segnalazione implicati nella differenziazione e nel rimodellamento muscolare. Un’alterazione della funzione di FHL1 è associata a miopatie e cardiomiopatie ereditarie, in cui interazioni proteina–proteina compromesse possono perturbare l’integrità sarcomerica e le vie di risposta allo stress. Oltre alla biologia muscolare, FHL-1 è stata utilizzata come modello per studiare l’assemblaggio di complessi di segnalazione mediato dai domini LIM e la regolazione dell’espressione genica dipendente dal contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FHL-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FHL1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FHL1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FHL1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FHL-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FHL1 per lo studio della segnalazione di FHL-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FHL1 critici per la funzione di FHL-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FHL1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FHL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FHL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FHL1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FHL-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FHL-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FHL1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FHL1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.