FGF-13 Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-420327-LAC-2

Il gene murino Fgf13 codifica il fattore di crescita dei fibroblasti 13 (FGF-13), un membro della famiglia degli FGF intracellulari che funziona principalmente come regolatore dell’eccitabilità e dell’organizzazione del citoscheletro, più che come fattore di crescita secreto. FGF-13 modula il traffico verso la membrana e le proprietà di gating dei canali del sodio voltaggio-dipendenti, influenzando l’inizio e la conduzione del potenziale d’azione in neuroni e cardiomiociti, e contribuisce alla polarizzazione dipendente dai microtubuli e alla migrazione neuronale durante lo sviluppo. Grazie ai suoi ruoli nella regolazione dei canali ionici e nella formazione dei circuiti neuronali, Fgf13 è rilevante per studi su fenotipi del neurosviluppo e associati alle crisi epilettiche, nonché su anomalie della conduzione cardiaca. L’editing genetico di Fgf13 in modelli murini consente di chiarire i meccanismi delle canalopatie, della segnalazione dipendente dall’attività e della morfogenesi di assoni e dendriti mediante elettrofisiologia, imaging e profilazione trascrittomica.

Le particelle di attivazione lentivirale FGF-13 (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Fgf13 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FGF-13 (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Fgf13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FGF-13. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Fgf13 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.