FBL2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403555-ACT

FBXL2 (FBL2) codifica una proteina F-box che funge da componente di riconoscimento del substrato dei complessi E3 ubiquitina-ligasi SCF (SKP1–CUL1–F-box), collegando specifici bersagli alla degradazione proteasomiale dipendente dall’ubiquitina. Attraverso il turnover regolato di proteine di segnalazione e del ciclo cellulare, FBXL2 contribuisce al controllo della proliferazione, dell’apoptosi e delle vie di risposta allo stress, incluse reti di segnalazione che convergono su MAPK e su output dell’immunità innata. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di FBXL2 sono state associate a una disregolazione dell’omeostasi proteica e della segnalazione infiammatoria, processi frequentemente implicati nella biologia del cancro e nelle patologie immuno-mediate. In quanto nodo del sistema ubiquitina–proteasoma, FBXL2 è comunemente studiata in contesti che coinvolgono la proteostasi, la regolazione dei checkpoint e il rimodellamento delle vie di segnalazione durante la trasformazione cellulare.

FBL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FBXL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FBL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FBXL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FBXL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FBL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FBXL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FBL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FBL2 nelle cellule tumorali con espressione di FBXL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.