FBL19 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-407318-LAC

FBXL19 (FBL19) codifica una proteina contenente un dominio F-box e ripetizioni ricche in leucina, che funziona come componente di riconoscimento del substrato dei complessi E3 ubiquitina ligasi di tipo SCF (SKP1–CUL1–F-box), indirizzando proteine specifiche verso l’ubiquitinazione e la successiva degradazione proteasomiale. Attraverso il controllo della stabilità proteica, FBXL19 contribuisce alla regolazione della progressione del ciclo cellulare, della trasduzione del segnale e di processi associati alla cromatina che modellano i programmi trascrizionali. FBXL19 è stato inoltre collegato alla regolazione genica associata alle isole CpG tramite interazioni con la cromatina e con il macchinario trascrizionale, mettendo in relazione la segnalazione mediata dall’ubiquitina con il controllo epigenetico. La deregolazione della proteostasi mediata dall’ubiquitina e della regolazione trascrizionale che coinvolge FBXL19 è rilevante negli studi sulla segnalazione oncogenica, sulla differenziazione e su altri stati cellulari associati a patologie.

Le particelle di attivazione lentivirale FBL19 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FBXL19 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FBL19 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FBXL19, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FBL19. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FBXL19 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.