Factor XIII B Plasmide Double Nickase (h): sc-403574-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Factor XIII B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Factor XIII B Double Nickase Plasmid (h) e il Factor XIII B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira F13B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Factor XIII B Antibody (GMA-033): sc-65957
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Factor XIII B Plasmide Double Nickase (h) | sc-403574-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Factor XIII B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403574-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
F13B codifica la subunità B del fattore della coagulazione XIII, una proteina vettore non catalitica che stabilizza la subunità A (F13A1) nel plasma e ne regola la disponibilità per l’attivazione durante la fase terminale della cascata coagulativa. In seguito all’attivazione del fattore XIII dipendente da trombina e calcio, la transglutaminasi della subunità A reticola la fibrina e altre proteine della matrice extracellulare, aumentando la resistenza alla trazione del coagulo e la sua resistenza alla fibrinolisi. Attraverso questi processi, la subunità B del fattore XIII sostiene l’emostasi e collega la coagulazione alle vie di riparazione delle ferite e di rimodellamento della matrice. Alterazioni genetiche o funzionali di F13B sono associate a fenotipi di deficit del fattore XIII e a una stabilità del coagulo modificata, rendendolo rilevante per lo studio dei disturbi emorragici e della biologia trombo-infiammatoria.
Factor XIII B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus F13B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di F13B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di F13B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con F13B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.