ERF Plasmide Double Nickase (h): sc-403877-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ERF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ERF Double Nickase Plasmid (h) e il ERF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ERF. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ERF Antibody (E-9): sc-398269
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ERF Plasmide Double Nickase (h) | sc-403877-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403877-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERF (fattore repressore ETS2) è un fattore di trascrizione della famiglia ETS espresso in modo ubiquitario, che si lega a motivi GGAA/T per regolare programmi genici che controllano proliferazione, differenziamento e omeostasi cellulare. Agisce a valle della segnalazione MAPK/ERK, in cui cambiamenti dipendenti dalla fosforilazione nella localizzazione e nell’attività di ERF modulano la dinamica di repressione e attivazione trascrizionale. ERF contribuisce alla regolazione di vie di sviluppo ed ematopoietiche e si integra con reti trascrizionali più ampie che influenzano il controllo del ciclo cellulare e le risposte allo stress. Un’attività o un’espressione deregolata di ERF è stata associata ad alterazioni dell’output della via MAPK ed è stata implicata in contesti quali fenotipi dello sviluppo craniofacciale e rimodellamento trascrizionale correlato al cancro.
ERF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERF interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.