Ep-CAM Plasmide Double Nickase (h): sc-400220-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ep-CAM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ep-CAM Double Nickase Plasmid (h) e il Ep-CAM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EPCAM. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ep-CAM Antibody (C-10): sc-25308
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ep-CAM Plasmide Double Nickase (h) | sc-400220-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ep-CAM Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400220-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPCAM codifica la molecola di adesione delle cellule epiteliali (Ep-CAM), una glicoproteina transmembrana arricchita nelle giunzioni epiteliali che sostiene l’adesione omotipica cellula‑cellula e il mantenimento dell’architettura epiteliale. Oltre alla funzione adesiva, Ep-CAM partecipa alla regolazione di proliferazione e differenziamento attraverso programmi di segnalazione che intersecano l’attività Wnt/β‑catenina e i processi associati alla transizione epitelio‑mesenchimale. L’alterazione dell’espressione di EPCAM e le varianti genetiche sono collegate alla biologia dei tumori epiteliali, influenzando adesione cellulare, migrazione e organizzazione tissutale in molteplici contesti di carcinoma. EPCAM è anche ampiamente utilizzato come marcatore molecolare di linea epiteliale e nella ricerca sulle cellule tumorali circolanti, consentendo studi sull’identità epiteliale e sulla plasticità.
Ep-CAM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EPCAM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EPCAM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EPCAM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EPCAM interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.