ELL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420159

Panoramica

Ell codifica ELL, un fattore di elongazione della RNA polimerasi II che promuove una trascrizione processiva limitando le pause della polimerasi e sostenendo una sintesi produttiva dell’mRNA. ELL partecipa a complessi regolatori della trascrizione che coordinano l’elongazione con il contesto della cromatina e con il processamento dell’RNA, influenzando così programmi di espressione genica legati all’identità cellulare e alla proliferazione. L’alterazione dell’elongazione dipendente da ELL può modificare la fedeltà trascrizionale e le vie di risposta allo stress, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi alla base della disregolazione dell’espressione genica nelle reti trascrizionali associate al cancro. Nei modelli murini, Ell rappresenta un punto d’ingresso maneggevole per studiare il controllo dell’elongazione nello sviluppo, nella regolazione ematopoietica e nelle dinamiche trascrizionali a livello dell’intero genoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ELL (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ell in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ell insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ell a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ELL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ell per lo studio della segnalazione di ELL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ell critici per la funzione di ELL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ell per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ELL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ELL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ell. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ELL Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ELL (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ell per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ell definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.