EHHADH Plasmide Double Nickase (h): sc-404068-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EHHADH Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EHHADH Double Nickase Plasmid (h) e il EHHADH Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EHHADH. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EHHADH Antibody (D-2): sc-393123
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EHHADH Plasmide Double Nickase (h) | sc-404068-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EHHADH Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404068-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EHHADH codifica l’enoil-CoA idratasi/3-idrossiacil-CoA deidrogenasi, un enzima perossisomiale bifunzionale che catalizza passaggi sequenziali della β-ossidazione degli acidi grassi, in particolare per substrati a catena molto lunga e a catena ramificata. Sostenendo il catabolismo lipidico perossisomiale e l’equilibrio redox, EHHADH influenza l’omeostasi energetica cellulare e le vie di segnalazione lipidica che interagiscono con il metabolismo mitocondriale. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di EHHADH sono state associate a disregolazione metabolica in fegato e rene e vengono frequentemente studiate in contesti quali disturbi correlati ai perossisomi, steatosi e modelli di danno renale.
EHHADH Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EHHADH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EHHADH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EHHADH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EHHADH interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.