EBF1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401258-ACT

EBF1 (early B-cell factor 1) è un fattore di trascrizione che definisce la linea cellulare e regola l’accessibilità della cromatina e i programmi di espressione genica necessari per l’impegno verso la linea B, la differenziazione e l’omeostasi del sistema immunitario. Nelle cellule ematopoietiche, EBF1 coopera con fattori quali PAX5 ed E2A per coordinare reti trascrizionali che controllano la ricombinazione V(D)J, la competenza nella segnalazione del recettore delle cellule B e la sopravvivenza. Oltre alla linfopoiesi, EBF1 svolge ruoli nell’adipogenesi e nello sviluppo del sistema nervoso attraverso un controllo trascrizionale specifico del contesto. Un’espressione o una funzione deregolata di EBF1 è stata associata a uno sviluppo compromesso delle cellule B e a stati trascrizionali alterati osservati nella biologia delle patologie ematologiche.

EBF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EBF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EBF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EBF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EBF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EBF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EBF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EBF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EBF1 nelle cellule tumorali con espressione di EBF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.