EAP30 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406312

Panoramica

SNF8 codifica EAP30, un componente centrale del complesso ESCRT-II che coordina lo smistamento endosomiale delle proteine di membrana ubiquitinate verso i corpi multivescicolari per la degradazione lisosomiale. Attraverso il rimodellamento di membrana dipendente da ESCRT, EAP30 supporta la downregulation dei recettori, il traffico endolisosomiale e l’accoppiamento di ESCRT-II a ESCRT-III durante la formazione delle vescicole intraluminali. Questi processi influenzano l’attenuazione delle vie di segnalazione, l’omeostasi delle proteine di membrana e aspetti della citochinesi e della gemmazione virale che dipendono dal macchinario ESCRT. La disregolazione del traffico mediato da ESCRT è stata collegata ad alterazioni della segnalazione dei recettori per i fattori di crescita, a stress della proteostasi e a instabilità genomica, rendendo SNF8/EAP30 rilevante per studi di biologia del cancro e di difetti endolisosomiali associati alla neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EAP30 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SNF8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SNF8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SNF8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EAP30.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SNF8 per lo studio della segnalazione di EAP30, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SNF8 critici per la funzione di EAP30
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SNF8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EAP30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EAP30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SNF8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EAP30 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EAP30 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SNF8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SNF8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.