Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Plasmide Double Nickase (m): sc-420081-NIC

Il gene murino Dvl2 codifica Dishevelled 2 (DVL2), una proteina scaffold citoplasmatica che trasmette i segnali dei ligandi Wnt dai recettori Frizzled agli effettori a valle. DVL2 integra i programmi trascrizionali della via canonica Wnt/β-catenina con le vie non canoniche della polarità cellulare planare e Wnt/Ca²⁺, influenzando la polarità cellulare, il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione e la definizione dei pattern di sviluppo. Modulando l’output della via, DVL2 contribuisce a un controllo dipendente dal contesto di proliferazione e differenziamento, ed è quindi ampiamente studiata nella morfogenesi dei tessuti e nella biologia delle cellule staminali. La deregolazione della segnalazione Wnt–Dishevelled è implicata in difetti congeniti dello sviluppo e nel rimodellamento della segnalazione associato a malattie, a supporto di indagini meccanicistiche sulla regolazione della via in modelli murini.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dvl2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dvl2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dvl2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dvl2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.