Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420081-ACT

Il gene murino Dvl2 codifica Dishevelled 2 (DVL2), una proteina scaffold citoplasmatica che trasduce i segnali Wnt verso gli effettori a valle sia nella via canonica, dipendente dalla β-catenina e dalla trascrizione, sia nelle vie non canoniche della polarità planare (PCP) e Wnt/Ca2+. Accoppiando gli input dei recettori Frizzled/LRP ai componenti della via, come Axin, GSK3 e piccole GTPasi, DVL2 influenza la specificazione del destino cellulare, la polarità, la migrazione e l’organizzazione del citoscheletro durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. Una deregolazione della segnalazione Wnt–DVL2 è implicata in programmi aberranti di proliferazione e differenziamento, rendendo Dvl2 un bersaglio frequente negli studi sulle reti di segnalazione oncogeniche e sui disturbi dello sviluppo. Il suo ruolo centrale di adattatore favorisce inoltre l’indagine del cross-talk della via con MAPK, PI3K/AKT e i processi di rimodellamento del citoscheletro in fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Dvl2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Dvl2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Dvl2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Dvl2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dvl-2/Dishevelled 2/DVL2 nelle cellule tumorali con espressione di Dvl2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.